田旭军 廖逊 李荣玉 李明 吴小毛 龙友华
摘 要：采用菌丝生长速率法测定了3种中药乙醇提取物对猕猴桃葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea）的毒力以及联合作用。结果表明：苦参、丹参以及黄岑片3种乙醇提取物对B.dothidea菌丝生长均有一定的抑制作用，其EC50分别为60.44、60.78和97.86 μg/mL。苦参和丹参提取物以有效质量比为1∶ 1、1∶ 3、1∶ 6时对猕猴桃B.dothidea均表现为增效作用，其CTC分别为133.16、126.16和129.56；
而黄岑片·苦参、黄岑片·丹参的提取物复配则均表现为相加作用，其CTC为80.71～117.62。该研究结果可为防治猕猴桃软腐病的药剂组合提供参考。
关键词：
中药提取物；
猕猴桃；
葡萄座腔菌；
毒力；
联合作用
中图分类号：S435.6
文献标识码：A
文章编号：1008－0457（2023）02－0086－04
国际DOI编码：10.15958/j.cnki.sdnyswxb.2023.02.013
猕猴桃（Actinidia chinensis Planch）属猕猴桃科（Actinidiaceae）猕猴桃属（Actinidia），其果实中含有丰富的K、Zn、Ca等多种矿物元素、氨基酸和维C等物质，因此被誉为“人间仙果”“果中之王”和“维C之王”等［1-4］。猕猴桃采摘后储藏期间最常见的一种潜伏性病害（软腐病）发生严重，腐烂率可达50%以上，严重影响猕猴桃的品质和经济价值。猕猴桃软腐病又称熟腐病，主要是由葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea）、拟茎点霉菌（Phomopsis macrospore）和灰霉菌（Botrytis cinerea）等病原菌引起的软腐病［5-8］，而葡萄座腔菌被认为是引起该病害的主要致病菌，发病快且难以防治［9-10］，给猕猴桃产业带来严重影响。目前，猕猴桃软腐病的防治依然以化学防治为主，为了降低对化学农药的过度依赖，筛选高效生物农药是一种较好的选择。近年来，植物源杀菌剂作为“环境和谐农药”和“生物合理性农药”的重要组成部分［11］，植物源杀菌剂因其具有高效、低毒、易降解以及不产生抗药性等优点而受到人们的高度关注。国内外很多学者对其进行了研究，如王帆帆等［12］明确了丁子香酚和蛇床子素对草茎点霉的室内毒力较高；
高以宸等［13］的研究表明了红蓼挥发油在种子发芽期及苗期对马铃薯环腐病菌有显著的抑制作用；
Meena等［14］研究表明，牛蹄豆的水提物对茉莉的Sclertium rolfsii病菌具有一定的抑制作用。因此，本文选取了黄岑片、丹参、苦参3种中药添加乙醇进行提取，并研究乙醇提取物对猕猴桃软腐病致病菌（葡萄座腔菌）的抑制作用，以及测定黄岑片、丹参和苦参3种乙醇提取物组合的联合毒力，以期为猕猴桃软腐病的防治及生物农药的筛选提供依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 供试病原菌
猕猴桃葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea）由贵州大学农学院农产品质量安全实验室供给。
1.1.2 供试药剂及仪器设备
供试药剂：黄岑片无水乙醇提取物、苦参无水乙醇提取物、丹参无水乙醇提取物。
仪器设备：SJ-CJ-2FD超净工作台（苏州苏洁净化设备有限公司）、BIC-400人工气候箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）、立式压力蒸气灭菌器（LDZM-80L-1，上海申安医疗器械厂）、接种针、5 mm打孔器、9 mm培养皿、1 mL和5 mL移液枪及枪头、10 mL离心管等。
1.1.3 供试培养基
PDA培养基参照刘世江等［15］的方法，略加修改，具体如下：马铃薯200 g、葡萄糖15～20 g、琼脂20 g、纯净水1000 mL。煮好后在121 ℃条件下灭菌20 min，冷却至50 ℃左右备用。
1.2 试验方法
1.2.1 3种中药乙醇提取物对猕猴桃软腐病菌的毒力测定
采用菌丝生长速率法［16］测定黄岑片、苦参和丹参3种中药乙醇提取物对猕猴桃软腐病菌的毒力。根据所设浓度梯度配置成相应的母液，将其与PDA以体积比为1∶ 9倒入平板中，制成含黄岑片乙醇提取物25、50、100、200、400 μg/mL的系列浓度含药平板；
含苦参乙醇提取物25、50、100、200、400 μg/mL的系列浓度含药平板；
含丹参乙醇提取物25、50、100、200、400 μg/mL的系列浓度含药平板，沿活化的菌落边缘取直径为5 mm的菌饼，接至含不同浓度的PDA平板中央，置于培养箱中培养。并采用十字交叉法测量各药剂各浓度的菌落直径，并利用Excel 2010计算出毒力回归方程、有效抑制中浓度（EC50）及其相关系数等。
1.2.2 3种中药乙醇提取物及其组合对猕猴桃软腐病菌的联合作用
采用菌丝生长速率法测定黄岑片、苦参和丹参乙醇提取物两两复配对猕猴桃软腐病菌的联合作用。沿活化的菌落边缘 取直径为5 mm的菌饼，接
至含不同组合不同浓度的PDA平板中央，各组合各比例的浓度见表1，并采用 1.2.1 中的方法测定各组合各比例对猕猴桃软腐病菌的毒力。根据孙云沛法［17］进行数据处理，计算混剂的共毒系数（CTC），当共毒系数大于120时，表现为增效作用，小于80时表现为拮抗作用，在80～120之间时则表现为相加作用［18］。
2 结果与分析
2.1 黄岑片、苦参和丹参3种中药提取物对葡萄座腔菌的毒力分析
黄岑片、苦参及丹参3种中药乙醇提取物对猕猴桃软腐病致病菌（葡萄座腔菌）菌丝生长均具有一定的抑制作用（表2），其EC50分别为97.86、60.44和60.78 μg/mL。丹参、苦参和黄岑片乙醇提取物对猕猴桃软腐病致病菌（葡萄座腔菌）的抑制作用无明显差异，其中苦参和丹参乙醇提取物对猕猴桃葡萄座腔菌抑制作用較强，而黄岑片乙醇提取物抑制活性较弱。
2.2 3种中药提取物组合对猕猴桃软腐病菌的联合毒力
2.2.1 黄岑片和苦参提取物组合对猕猴桃葡萄座腔菌的联合毒力
黄岑片和苦参乙醇提取物组合（6∶ 1、3∶ 1、1∶ 1、1∶ 3、1∶ 6）对猕猴桃软腐病致病菌（葡萄座腔菌）菌丝生长均有一定的抑制作用（表3）。根据EC50可知， 苦参提取物对猕猴桃葡萄座腔菌菌丝生长的抑制作用要优于黄岑片提取物，其EC50值分别为68.34和98.16 μg/mL；
黄岑片·苦参乙醇提取物以有效质量比为6∶ 1、3∶ 1、1∶ 1、1∶ 3、1∶ 6时均表现为相加作用，其共毒系数（CTC）为84.59～96.15。
2.2.2 黄岑片和丹参提取物组合对猕猴桃葡萄座腔菌的联合作用
黄岑片和丹参乙醇提取物组合（6∶ 1、3∶ 1、1∶ 1、1∶ 3、1∶ 6）对猕猴桃葡萄座腔菌菌丝生长均具有一定的抑制作用（表4）。黄岑片和丹参提取物对猕猴桃葡萄座腔菌的抑制作用无显著差异，其EC50分别为98.16、89.35 μg/mL；
黄岑片和丹参提取物组合中，黄岑片和丹参提取物以有效质量比为1∶ 3和1∶ 6时相加作用比较明显，其CTC分别为112.86和117.62。
2.2.3 苦参和丹参提取物组合对猕猴桃葡萄座腔菌的联合作用
苦参和丹参提取物5个组合（6∶ 1、3∶ 1、1∶ 1、1∶ 3、1∶ 6）对猕猴桃软腐病致病菌（葡萄座腔菌）菌丝生长均有一定的抑制作用（表5）。根据其EC50可知，苦参提取物对猕猴桃葡萄座腔菌菌丝生长的抑制效果要好于丹参提取物，其EC50分别为68.34和89.35 μg/mL；
苦参·丹参提取物以有效质量比为6∶ 1和3∶ 1时表现为相加作用，其EC50分别为70.55和65.04 μg/mL，CTC分别为100.23和111.63；
而苦参·丹参提取物以有效质量比为1∶ 1、1∶ 3和1∶ 6时表现为增效作用，其CTC值分别为133.16、126.16和129.56，均大于120。
3 結论与讨论
本研究明确了黄岑片、苦参以及丹参3种乙醇提取物对猕猴桃葡萄座腔菌具有一定的抑制作用，其EC50为60.44～97.86 μg/mL。联合作用表明，本研究筛选出的3个复配组合对猕猴桃葡萄座腔菌具有增效作用，分别为苦参·丹参以有效质量比为1∶ 1、1∶ 3、1∶ 6，其CTC分别为133.16、126.16和129.56。以上3种中药提取物对葡萄座腔菌引起的猕猴桃熟腐病的防治效果未见相关报道，但张盈等［19］研究表明了黄岑片对引起小麦赤霉病的禾谷镰孢菌具有较好的抑制效果；
杨波等［20］也明确了0.3%苦参碱对葡萄霜霉病菌的EC50值和EC90值分别为2.1834和0.5464 mg/L；
并且梁魁景等［21］研究表明3%苦参碱AS对苹果斑点落叶病菌也具有较好的抑制作用。这些研究表明黄岑片、苦参和丹参对不同作物不同病原菌均具一定的抑制作用，与本试验的研究结果一致。
随着我国猕猴桃产业的迅猛发展，猕猴桃软腐病逐步得到重视。该病大多发生在果实采摘后贮藏期，当果实发病后，其果肉组织变成水渍状。病斑中心呈现乳白色，周围的果肉组织变成黄绿色，病斑形状表现为圆形或椭圆状，病斑可逐渐扩大引起整果腐烂［22］。目前，化学防治仍是防治猕猴桃软腐病的主要措施，如5%己唑醇ME、10%苯醚甲环唑WG以及50%咪酰胺锰盐WP等药剂对葡萄座腔菌菌丝及孢子均具有较好的毒杀作用［23］。但由于化学农药长期单一的使用，易导致抗性 （resistance）、再猖獗（resurgence）以及残留（residue）等问题。而生物农药具有不易产生抗药性、对环境友好、对非靶标生物安全等特点［9］。在绿色、有机农业生产中生物农药成为了防治病虫害的主要手段。鉴于此，本研究主要选择了黄岑片、苦参和丹参3种中药提取物对引起猕猴桃熟腐病的葡萄座腔菌进行室内生物活性测，筛选出最佳组合，以期为猕猴桃熟腐病的防治提供新的防治措施。
（责任编辑：胡吉凤）
参 考 文 献：
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Toxicity and Combined Effects of Three Herbal Extracts on Botryosphaeria dothidea of Kiwifruit
Tian Xujun，Liao Xun，Li Rongyu*，Li Ming，Wu Xiaomao，Long Youhua
（Institute of Crop Protection/Engineering and Technology Research Center of Kiwifruit，Guizhou University，Guiyang，Guizhou 550025，China）
Abstract：
The virulence of three herbal extracts against the soft rot fungus （Botryosphaeria dothidea） of kiwifruit and the combined effect of the mixture were determined by the mycelial growth rate method.The results showed that Sophora flavescens，Salvia miltiorrhiza and Scutellaria baicalensis showed some inhibitory effects on B.dothidea with EC50 of 60.44，60.78 and 97.86 μg/mL，respectively.S.baicalensis and S.flavescens showed potentiation at effective mass ratios of 1∶ 1，1∶ 3 and 1∶ 6，with CTCs of 133.16，126.16 and 129.56，respectively.The extract combinations of S.baicalensis-S.flavescens and S.baicalensis-S.miltiorrhiza all showed additive effects with CTCs ranging from 80.71 to 117.62.The results of this study may provide a reference for determining the combination of agents for the control of soft rot of kiwifruit.
Keywords：
Chinese herbs extracts; kiwifruit; Botryosphaeria dothidea; toxicity; combined effect
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