贾旭爽，陈宇杨，鲍慧玮，张亚杰(长春中医药大学·吉林 长春·130117)
黄芪-甘草药对始载于《太平惠民和剂局方·卷五治诸虚》，由黄芪-甘草两味药组成[1]，黄芪甘温，补脾肺、升清阳，为补气要品;甘草甘平，补脾胃，益中气。两药相须配伍，取甘以守中，使补中益气之力增强[2]。本课题以甘草、黄芪为研究对象，通过逆转录聚合酶链反应检测5种酶的mRNA表达，以此为甘草、黄芪药对的临床合理联合用药提供实验依据。
1.1 药品与试剂
甘草与黄芪两种饮片均购自吉林省宏检大药房有限公司；
RNA提取试剂盒(Biomed公司)；
逆转录酶及QSCR扩增试剂购自TransGen公司；
2 xTaqPCR Master Mix(北京天根生物科技有限公司);Fast Quant第一链合成试剂盒(批号:KRR121221，北京天根生物科技有限公司);RNA提取试剂盒(TaKaRa公司)。
1.2 仪器设备
台式低温高速离心机(上海飞鸽仪器厂);实时定量PCR仪（赛默飞世尔）；
酶标仪(伯乐生命医学产品(上海)有限公司)。
1.3 实验动物
雄性Wistar大鼠，体重180～220g，由长春市亿斯实验动物技术有限责任公司提供。这批大鼠的实验动物合格证号SCXK(吉)2020-0002。大鼠喂饲标准饲料和水，饲养于长春中医药大学动物中心、12h日夜节律。
2.1 药物的制备与配制
按《医林改错》中载黄芪和甘草的规定的剂量黄芪10g、甘草2.5g进行换算，取甘草、黄芪，浸泡1h，8倍水小火煎煮30min，过滤后滤渣6倍水再煎煮30min，两次滤液经70℃浓缩，最终得黄芪-甘草组浓度为0.14g/mL生药。甘草、黄芪单煎液的浓度为0.14g/mL生药、0.028g/mL生药。
2.2 动物分组及给药
实验动物随机分为空白对照组、甘草组、黄芪组、甘草-黄芪组，每组5只，灌胃给药，14 d后，处死动物并提取部分动物肝脏-80℃保存，以备RNA检测。
2.3 RT-PCR技术测定大鼠肝脏mRNA表达
肝 脏 中CYP1A2，CYP2C9，CYP2C19，CYP2D6，CYP2E1酶基因的表达是通过反转录聚合酶链式反应来被量化。使用Trizol试剂盒从肝脏组织中提取总RNA,RNA含量通过260nm波长处的吸光度来测量。每只大鼠肝药酶的RNA样品纯度为A260/A280比值范围在1.8～2.2。随后，提取的肝药酶的RNA在FastQuant第一链合成试剂盒的作用下转变为cDNA，加入2 x TaqPCR Master Mix和特异性引物以及ddH2O进行cDNA扩增，将5种肝药酶和内参基因CYC用1.2%琼脂糖凝胶电泳进行分离辨认，在凝胶成像系统中对各个条带亮度进行测定，计算CYP1A2，CYP2C9，CYP2C19，CYP2D6，CYP2E1和CYC基因扩增条带表达量像素灰度值比值[3]。
2.4 数据处理及统计分析
3.1 甘草-黄芪及单药对大鼠肝脏5种肝药酶mRNA基因表达的影响
与空白对照组比，甘草、甘草-黄芪对CYP1A2 mRNA的表达具有显著的上调作用(P＜0.05)，而黄芪具有上调趋势,结果见图1;甘草、黄芪、甘草-黄芪CYP2C19 mRNA的表达都具有显著的下调作用(P＜0.01)，结果见图2;各组对CYP2D6 mRNA的表达无影响，结果见图3；
各组对CYP2E1 mRNA的表达都具有显著的上调作用(P＜0.01)，结果见图4；
甘草、黄芪、甘草-黄芪对CYP2C9 mRNA的表达都具有显著的下调作用(P＜0.05)，结果见图5。
图1 甘草-黄芪以及2味单药对大鼠肝脏CYP1A2酶mRNA表达影响（±s，n=5）Fig.1 Effects oflicorice–astragalus and its two componts drugs onmRNA expression of CYP1A2 enzyme in rat liver（±s，n=5）
图2 甘草-黄芪以及2味单药对大鼠肝脏CYP2C19酶mRNA表达影响（±s，n=5）Fig.2 Effects of licorice–astragalus and its two componts drugs on mRNA expression of CYP2C19 enzyme in rat liver（±s，n=5）
图3 甘草-黄芪以及2味单药对大鼠肝脏CYP2D6酶mRNA表达影响（±s，n=5）Fig.3 Effects of licorice–astragalus and its two componts drugs on mRNA expression of CYP2D6 enzyme in rat liver（±s，n=5）
图4 甘草-黄芪以及2味单药对大鼠肝脏CYP2E1酶mRNA表达影响（±s，n=5）Fig.4 Effects of licorice–astragalus and its two componts drugs on mRNA expression of CYP2E1 enzyme in rat liver（±s，n=5）
图5 甘草-黄芪以及2味单药对大鼠肝脏CYP2C9酶mRNA表达影响（±s，n=5）Fig.5 Effects of licorice–astragalus and its two componts drugs on mRNA expression of CYP2C9 enzyme in rat liver（±s，n=5）
药对是中医用药的的常见方式，药对有的是来源于古代经典名方的配伍，也可以是现代医家的临床经验的总结，药对在用药过程中可以单用，也是某些复方的组成单位。甘草和黄芪药对既可以单独成方“黄芪甘草汤”，也可以和其他药物配成复方，不同药物配伍使用的过程中会发生相互作用，其中一种可能是对肝药酶产生诱导或抑制作用，从而使药物的疗效和损害作用产生影响，研究药物对肝药酶的影响可以为临床高效低毒用药提供参考。
本研究从对肝药酶活性、mRNA表达的层面来阐述甘草、黄芪配伍对CYP450酶的影响。结果显示，甘草-黄芪能诱导CYP1A2酶和CYP2E1酶，抑制CYP2C19,CYP2C9酶。因此，如果治疗过程中需要合用黄芪甘草汤或含有甘草-黄芪药对的复方时，要注意药物的减量或增量，提高药物的治疗效果，降低药物治疗的不良反应发生率。
猜你喜欢单药甘草黄芪“补气之王”黄芪，你吃对了吗？今日农业(2022年13期)2022-09-15HEPSERA联合ADV ABPC与BARACLUDE单药治疗HEPATIC SCLEROSIS疗效比较分析中国药学药品知识仓库(2022年9期)2022-05-23炙甘草汤，适用于哪些病症中老年保健(2021年9期)2021-08-24黄芪是个宝海峡姐妹(2019年3期)2019-06-18带鱼黄芪汤缓解胃下垂特别健康(2018年4期)2018-01-28恩替卡韦单药与阿德福韦酯联合拉米夫定治疗乙肝肝硬化的疗效比较中国卫生标准管理(2015年1期)2016-01-14唑来膦酸单药治疗肺癌骨转移患者的疗效及不良反应中国继续医学教育(2015年1期)2016-01-06DC－CIK生物免疫疗法联合单药化疗治疗老年晚期非小细胞肺癌的回顾性研究中国药业(2014年24期)2014-05-26芍药甘草汤加味治疗坐骨神经痛42例中医研究(2014年2期)2014-03-11炙甘草水煎液的HPLC-MS分析中成药(2014年10期)2014-02-28
