袁晓娟 ，吴冬梅，金 鸿，倪定琴，姚 曼，余 琼，刘铭英
1 贵州省黔东南州动物疫病预防控制中心，贵州凯里 556000 2 贵州省凯里市动物疫病预防控制中心，贵州凯里 556600
牛传染病严重威胁养牛业的健康发展、公共卫生食品安全和人类健康，养殖场必须做好奶牛的免疫接种和防控工作。常见的牛呼吸道类疾病有牛病毒性腹泻（Bovine Viral Diarrhoea/Mucosal disease，BVD）、传染性鼻气管炎（Infectious Bovine rhinotracheitis，IBR）、牛呼吸道合胞体病（Bovine Respiratory Syncytia，BRS）、牛支原体。临床症状主要有流涕、咳嗽、精神食欲不振、呼吸困难等。单一病原体感染会引起其他病原体的混合感染，由此给牛场防疫带来巨大挑战。贵州省凯里市A奶牛场作为黔东南州唯一的规模奶牛场，本文对其2021—2022年牛呼吸道疫病的感染情况进行了初步了解，为该场有效防控上述疾病提供理论依据。
1.1 试验材料
2021—2022年从凯里市A奶牛场采集牛血清142 份，其中犊牛33 份，成年牛109 份。常温离心保存于-20 ℃冰箱备用。所采牛群均未免疫接种BRSV、BVDV、IBRV、牛支原体疫苗。
1.2 试剂盒
牛呼吸道合胞体病毒IgG抗体检测试剂盒、传染性牛鼻气管炎gB抗体检测试剂盒、牛病毒性腹泻病毒抗体检测试剂盒，元亨IDEXX公司；
牛支原体ELISA抗体检测试剂盒，比利时Bio-X公司。
1.3 主要试验仪器
酶标仪（Multiskan FC型），赛默飞世尔科技（中国）有限公司；
离心机（艾本德-5418），德国艾本德股份公司；
摩尔超纯水机（1015a），上海摩勒科学仪器有限公司；
恒温培养箱（ZHWY-21B），金坛市富华仪器有限公司。
1.4 试验方法
本试验采用ELISA法进行抗体水平检测，根据试剂盒说明书严格操作。
2.1 A奶牛场4种病原单一感染检测结果
结果显示，从A奶牛场采集的142 份血清中，检出牛支原体抗体阳性48 份，阳性率33.8%；
IBRV抗体阳性64 份，阳性率45.1%；
BRSV抗体阳性59 份，阳性率41.5%；
BVDV抗体阳性57 份，阳性率40.1%。从不同生长阶段看，犊牛单一感染率为15.1%～45.5%，成年牛单一感染率为38.5%～51.4%，结果说明该奶牛场存在4 种病原体感染（表1）。
表1 A奶牛场4 种病原抗体检测结果
2.2 A奶牛场4 种病原混合感染情况
A奶牛场存在2～4 种病原体混合感染的情况，平均感染率为9.9%～30.2%。二重平均感染率为18.3%～30.2%；
以IBRV、BVDV、支原体3 种病原体混合感染为主，阳性率为19.7%；
三重平均感染率为12.6%～19.7%；
四重平均感染率为9.9%。提示A奶牛场存在多种病原体混合感染（表2）。
表2 A奶牛场IBRV、BRSV、BVDV、牛支原体混合感染情况
3.1 单一病原体感染分析
近几年我国学者在国内多地进行相关呼吸道疫病病原的血清学调查，但目前还未见对凯里市多种牛病，特别是呼吸道综合征方面调查的报道。本文对凯里市IBRV、BRSV、BVDV、支原体感染4 种病原体血清学抗体检测发现，A奶牛场存在4 种主要危害牛呼吸道的病原体，单一感染率为33.8%～45.1%。我国牧场BVDV感染较普遍，如江浙部分地区BVDV感染率为13.1%，且主要为BVDV-1b与BVDV-1m亚型感染[1]。新疆13 个地区养殖场BVDV平均阳性检出率为22.5%～62.5%，总阳性率为40.0%[2]。姜玲玲等[3]调查贵州省部分县牛群BVDV抗体阳性率高达45.95%。陈颖彬等[4]对河北、天津、北京等共8 个地区进行BVDV血清抗体检测，平均阳性率为46.95%。山东省11 个规模奶牛场BVDV抗体平均阳性率为66.3%[5]。宁夏30 个规模奶牛场不容乐观，BVDV抗体阳性率为87.6%[6]。金一春等[7]对上海市松江区某奶牛场2016—2019年630 份血清样品进行IBR感染情况调查，总抗体阳性率为11.0%。曲萍等[8]对我国11 个牧区、半牧区省份的9 668 份牛血清进行调查，IBRV个体平均阳性率为52.77%，群体阳性率连续3 年在80%以上。刁彩霞等[9]对黑龙江省农垦地区14 个奶牛场进行IBRV抗体检测，IBRV血清抗体阳性率为18.64%～73.33%。李媛等[10]对我国2017—2018年西部和北部4 个省区（新疆、内蒙古、云南、西藏）的8 832 份血清样品进行牛支原体调查，2017和2018年各地牛支原体血清抗体阳性率平均为8.37%、15.67%，4 省2017—2018年支原体感染率为1.99%～36.32%。张建华等[11]2008—2016年对国内12 个地区30 个规模化奶牛场进行牛支原体感染情况调查，血清抗体阳性率为52.31%（441/843）。目前国内对于BRSV的血清流行病学调查研究较少，应加强对此调查研究，全面分析各地区的流行情况。
唐小明等[12]对湖南省14 个市（州）74 个规模牛场进行BVDV和IBRV血清学调查，BVDV阳性率为23.54%，IBRV阳性率为45.45%。王生梅[13]调查了2015—2019年青海省海北州牦牛336 份血清，BVDV平均感染率为11.11%～29.76%，IBRV抗体阳性率为8.89%～19.05%，呈现逐年递增趋势。王玙等[14]对甘肃省陇东南地区32 个规模牛场进行感染情况调查，IBRV阳性率为9.17%（22/240），牛支原体阳性率为2.38%（4/168）。刘泽余等[15]对吉林省9 区325 份牛血清样品进行呼吸道疾病调查，其中BVDV阳性率为74.77%，IBRV阳性率为57.23%，BRSV阳性率为27.69%。苏姣秀等[16]对广西7 市共27 家奶牛场进行流行病学调查，BVDV抗体阳性率为36.52%（168/460）、IBRV为26.74%（123/460），BRSV为54.44%（49/90）。
上述血清流行病学调查结果说明：我国不同地区牛群与牛场（肉牛场、奶牛场）普遍存在IBRV、BVDV、BRSV和支原体感染，只是严重程度不同，这与养殖模式与饲养管理水平高低有很大关系，如规模饲养感染率高于散养的感染率[17]。以上结果与本文结果有差别，原因可能是采样时间与采样范围不同所致。
3.2 混合病原体感染分析
BVDV、IBRV、BRSV、牛支原体等都是引起牛呼吸道综合征的病原体，BVDV和 IBRV是免疫抑制性疾病，可以使机体免疫力下降，诱发其他疾病，严重可致死亡，混合感染时临床症状更明显。曲萍等[8]对我国11 个牧区、半牧区省份的9 668 份牛血清进行IBRV和BVDV检测，两者在2014—2016年混合感染率为38.31%～43.59%。毕玉彧等[18]调查了山东、河北、甘肃、黑龙江4 省28 家规模化奶牛场，发现存在IBRV、BVDV和BRSV多种病原，2～3 种病原体的混合感染率为7.3%～30.5%。韩林梅等[19]调查了2016—2017年广西6 市2 400 份牛血清，IBRV与牛支原体的双重感染率为12.21%（293/2 400）。刘泽余等[15]调查了325 份牛血清样品，BVDV与IBRV混合感染率为31.69%，BVDV与BRSV混合感染率为9.54%，IBRV与BRSV混合感染率为1.85%，IBRV、BVDV与BRSV混合感染率为17.23%。目前国内报道支原体与IBRV、BVDV、BRSV病原混合感染的资料较少，本次调查首次统计出贵州省支原体与IBRV、BVDV、BRSV病原体混合感染的情况，为贵州省规模牛场对牛呼吸道疫病的防控提供了理论依据。当牛感染BVDV后机体免疫力下降，更易感染IBRV，又因BVDV可导致免疫抑制、持续性感染与不定期排毒，并与其他呼吸道病原体具有协同效应[20]，极可能引起其他病原体的继发感染与混合感染，也是本研究中IBRV、BVDV、BRSV和支原体存在多重混合感染的原因之一。
本调查表明，凯里市A奶牛场存在IBRV、BVDV、BRSV和支原体流行，多病原体混合感染情况较普遍，虽然感染率不高，但其作为黔东南州唯一的奶源基地，也要加强防控，杜绝潜在隐患。建议相关部门：一是严格检疫、避免引进隐性感染牛；
二是要持续监测IBRV、BVDV、BRSV和支原体的感染情况，清除疑似病牛；
三是提高奶牛场饲养管理水平和兽医对呼吸道疾病的辨别能力。
