张丽丽，徐晓芳，刘 君，孔桂之，曹 磊，梅俊红，吴进龙
(1.山东威瑞信试验检测有限公司，山东 济南 250119；
2.农业农村部农药检定所，北京 100125)
戊菌唑英文名称：penconazole，CAS号：66246-88-6，分子式：C13H15Cl2N3，化学名称：2-(2,4-二氯苯基戊基)-1H-1,2,4-三唑。戊菌唑是一种兼具保护、治疗和铲除作用的内吸性三唑类杀菌剂，是甾醇脱甲基化抑制剂，可由作物根、茎、叶等组织吸收，并向上传导。可用于防治南瓜、葡萄、仁果、观赏植物和蔬菜上的白粉菌科、黑星菌属、子囊菌纲、担子菌纲和半知菌类病原菌引起的病害有特效。
目前国内有关戊菌唑乳油的分析方法未见公开报道。本文采用高效液相色谱法对10%戊菌唑乳油进行定量分析，该方法操作简便快捷，分离效果好，精密度和准确度均能达到定量分析的要求。
2.1 试剂和溶液 甲醇(色谱纯)；
超纯水(电阻率18.2MΩ·cm，25℃)；
戊菌唑标样，已知质量分数98.2%；
10%戊唑醇乳油。
2.2 仪器 高效液相色谱仪：日立Primaide，具有可变波长紫外检测器和自动进样器；
日立色谱工作站；
色谱柱：250mm×4.6mm(i.d.)不锈钢柱，内装ZORBAX SB-C18、5μm填充物。
2.3 液相色谱操作条件 流动相：Ψ(甲醇：水)=75：25；
流速：1.0mL/min；
柱温：25±2℃；
检测波长：220nm；
进样体积：10μL；
保留时间：戊菌唑约8.9min。典型的戊菌唑标样和10%戊菌唑乳油的高效液相色谱图(图1、2)
图1 戊菌唑标样高效液相色谱图
图2 10%戊菌唑乳油高效液相色谱图
2.4 测定步骤
2.4.1 标样溶液的配制 称取0.05g(精确至0.000 1g)戊菌唑标样，置于50mL容量瓶中，加入20mL甲醇，超声波振荡5min，冷却至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀。用移液管移取上述溶液5mL，置于50mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。
2.4.2 试样溶液的配制 称取含0.05g(精确至0.000 1g)戊菌唑的试样，置于50mL容量瓶中，加入20mL甲醇，超声波振荡5min，冷却至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀。用移液管移取上述溶液5mL，置于50mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤。
2.4.3 测定 在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻2针标样溶液的响应值相对变化<1.2%后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。
2.4.4 计算 将测得的2针试样溶液以及试样前后2针标样溶液中戊菌唑峰面积分别进行平均。试样中戊菌唑的质量分数ω(%)，按式(1)计算：
(1)
式中：
A1──标样溶液中戊菌唑峰面积的平均值；
A2──试样溶液中戊菌唑峰面积的平均值；
m1──标样的质量，g；
m2──试样的质量，g；
P──标样中戊菌唑的质量分数，%。
3.1 色谱条件的选择 通过日立Primaide高效液相色谱仪的光谱数据采集功能，获得戊菌唑的紫外波长扫描图(图3)。从图中可以看到戊菌唑在波长220nm处有较大吸收，在该波长处灵敏度较高，干扰较少，能够满足分析的要求，故将检测波长确定为220nm。
图3 戊菌唑的紫外光谱图
色谱柱选择常用的ZORBAX SB-C18反相柱。根据戊菌唑物化性质和溶剂的紫外吸收波长，选择甲醇作为溶剂溶解样品，并以甲醇和水作为流动相。将流动相按不同比例在色谱柱上进行试验，随着甲醇比例的增加，保留时间减小，当甲醇与水比例达到80 ：20时，有杂质峰干扰戊菌唑，峰纯度达不到试验要求，最终选择Ψ(甲醇：水)=75：25作为流动相，流速1.0mL/min。该条件下，戊菌唑色谱峰峰形较好，与杂质能完全分离，具有良好的精密度和准确度，并且分析时间较短，提高了工作效率。
3.2 分析方法的特异性鉴定 按照2.4.1和2.4.2中方法分别配制标准溶液和样品溶液，按标准中方法对戊菌唑进行全波段扫描、峰纯度分析。从谱图可知戊菌唑在该分析方法下峰纯度均>990，有效成分出峰处无其他物质干扰，符合定量分析要求。
3.3 分析方法的线性相关性试验 称取0.05g(精确至0.000 1g)戊菌唑标样，置于50mL容量瓶中，加入20mL甲醇，超声波振荡5min，冷却至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀。用移液管移取3、4、5、6、7mL上述溶液，分别置于50mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，配制5个不同浓度的有效成分线性相关溶液。在上述色谱操作条件下进行分析，以戊菌唑浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标作标准曲线(图4)，得到戊菌唑线性回归方程为y = 82 834x +104 775，线性相关系数为0.999 8。
图4 戊菌唑线性关系图
3.4 分析方法的精密度试验 从同一产品中准确称取5个试样，在上述色谱操作条件下进行分析，测得戊菌唑的标准偏差为0.061，变异系数为0.60%(表1)。
表1 分析方法的精密度试验结果
3.5 分析方法的准确度试验 从已知质量分数的戊菌唑乳油(10.21%)中称取5个试样，分别加入一定量的戊菌唑标样(98.2%)，在上述色谱操作条件下进行分析，测得戊菌唑的平均回收率为100.03%(表2)。
表2 分析方法的准确度试验结果
试验建立了戊菌唑乳油有效成分含量测定的高效液相色谱分析方法，试验结果表明，本方法分离效果好、线性关系良好，具有较高的精密度和准确度，分析操作简便快捷，是戊菌唑乳油产品质量控制较为理想的分析方法。
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